分子生物学中常用的tag什么意思
是标签的意思
一般在蛋白表达的时候,为了便于蛋白的纯化,会在蛋白多肽的一段连接一些可以和其他物质结合的片段,通过这些片段纯化后再将这些片段切除。
金属螯合亲合层析,又称固定化金属离子亲合层析(Immobilized
metal
ion
affinity
chromatography,
IMAC),是近30年发展起来的一种新型分离技术。最早由Paroth等人提出。该方法利用蛋白质表面的一些氨基酸,如组氨酸、色氨酸、半胱氨酸等能和金属离子发生特殊的相互作用的原理,从而对蛋白质加以分离。这些作用包括配价键结合、静电吸附、共价键结合,其中以配价键结合为主,而且这其中又以6组氨酸标签(His-Tag)应用最为广泛。
以His-Tag纯化标签结合金属螯合亲合层析,为重组蛋白质的分离纯化提供了一个有力的工具。由于金属螯合亲合层析具有配体简单、吸附量大、分离条件温和、通用性强等特点,上样条件可选择范围广,在高盐、一定浓度的变性剂以及去垢剂的条件下,带6His纯化标签的蛋白质都可以和亲合填料特异性结合,逐渐成为分离纯化蛋白质等生物工程产品最有效的技术之一。
此外还有
myc,
flag,
gfp,
HA等等许多种标签(tag)。
His-Tag标记是什么方法
组氨酸标签。可与多种金属离子发生特殊的相互作用,包括Ca2+、Mg2+、Ni2+、Co2+等,其中以镍离子使用最为广泛。
在重组蛋白末端融合多个组氨酸成串的肽段(常用6个组氨酸)。凭借此组氨酸肽段与二价金属离子(镍、锌等)的螯合作用,便于用金属螯合亲和层析纯化蛋白质。也可以用针对组氨酸肽段的抗体来检测该融合蛋白。6个组氨酸的肽段可简写为6×His。
扩展资料:
组氨酸被认为是一种人类必需的氨基酸,主要是儿童。在发育多年之后,人类开始可以自己合成它,在这时便成为非必需氨基酸了。
在慢性尿毒症患者的膳食中添加少量的组氨酸,氨基酸结合进入血红蛋白的速度增加,肾原性贫血减轻,所以组氨酸也是尿毒症患者的必需氨酸。 在组氨酸脱羧酶的作用下,组氨酸脱羧形成组胺。
组氨酸标签,利用重组蛋白末端融合多个组氨酸成串的肽段(常用6个组氨酸)。
凭借此组氨酸肽段与二价金属离子(镍、锌等)的螯合作用,便于用金属螯合亲和层析纯化蛋白质。也可以用针对组氨酸肽段的抗体来检测该融合蛋白。6个组氨酸的肽段可简写为6×His。
参考资料来源:百度百科-组氨酸标签
蛋白纯化——His标签与GST标签
在标签蛋白纯化过程中,合适的标签不但有利于蛋白的纯化,促进蛋白的可溶性,同时还不能影响蛋白的结构功能和下游应用。
His-Tag(组氨酸标签)
His-Tag(组氨酸标签)His-Tag 由6-10 个组氨酸残基组成,分子量不到0.84KD,通常插入在目的蛋白的C 末端或N 末端。His-Tag是目前原核表达最常用的标签,蛋白纯化完之后可以不需切除此标签,也不会对蛋白产生功能影响。同时,蛋白纯化步骤简便,纯化条件温和,对蛋白也不会产生太大影响。His-Tag是蛋白纯化的首选标签。
His-Tag 的特点
His-Tag 本身的特性对目的蛋白没有影响,不会形成二聚体;
分子量较小,只有0.84KD,对蛋白的下游应用不会产生影响;
免疫原性低,可将纯化的蛋白直接注射动物进行免疫并制备 抗体 ;
His-Tag 与细菌的转录翻译机制兼容,有利于蛋白表达;
可与其他标签构建双标签表达,可用于多种蛋白表达系统,纯化条件温和对蛋白影响较小。
磁珠法纯化His-Tag蛋白的原理
海狸His-tag蛋白纯化磁珠以磁性 琼脂 糖微球为基质,活化偶联亚氨基二乙酸(IDA),分别螯合镍离子(Nickel)、钴离子(Cobalt)两种金属离子,组氨酸残基侧链与金属离子(镍/钴离子)有强烈吸引力,可通过磁性分离方式直接从生物样品中一步纯化出高纯度的目标蛋白,海狸His-Tag蛋白纯化磁珠纯化后的蛋白纯度高于85%。
GST-Tag(谷胱甘肽巯基 转移酶 标签)
GST-Tag(谷胱甘肽巯基转移酶标签)GST-Tag 相对分子质量较大,约为26KD,插入在目的蛋白的C 末端或N 末端,大肠杆菌中常用在N 端。GST(谷胱甘肽巯基转移酶) 蛋白本身是一个在解毒过程中起到重要作用的转移酶。一般选择GST 标签的目的有两个,一是提高蛋白表达的可溶性,二是提高蛋白的表达量。蛋白表达纯化结束后需根据不同的蛋白应用而确定是否切除标签,标签较大,切除与否需根据下游应用考虑。如果要去除GST 融合部分,可用位点特异性 蛋白酶 切除。检测方法可用GST 抗体或表达的目的蛋白特异性抗体检测。
GST-Tag 的特点
增加外源蛋白的可溶性;可在不同的宿主中表达,适用范围广;
可用不同的蛋白酶方便去除;
很好保留了蛋白的 抗原 性和生物活性,提高外原蛋白的稳定性;
高特异性,纯化方便且温和;
分子量较大,可能会影响 蛋白质 的功能和下游实验;
如果蛋白不可溶,很难用变性的方法纯化。
磁珠法纯化GST-Tag蛋白的原理
海狸GST融合蛋白纯化磁珠,通过磁珠偶联谷胱甘肽(GSH),利用谷胱甘肽与谷胱甘肽巯基转移酶之间酶和底物的特异性作用力,分离出带有GST标签的蛋白,纯化蛋白的纯度达到90%。
his-tag 标签问题
his tag本身就是为了便于你的蛋白纯化的啊...his tag一般不会影响蛋白工能的。
tag标签是什么意思 ?怎么用?
运用TAG标签,可以使你发表的文章更容易被搜索到。 TAG标签是一种由您自己定义的,比分类更准确、更具体,可以概括文章主要内容的关键词。(百度尤其喜欢)
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1、明确标签是为了方便用户设置的